Головна » Статті » Конференція_2015_03_19-20 » Секція_2_Технології_і_природа

НОВЫЙ ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ШТАММ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS

Пархоменко Татьяна

к.с.-х.н., с.н.с., ученый секретарь

Новиков Илья

младший научный сотрудник

Чайковский Владислав

микробиолог лаборатории

ГБУ «Научно-исследовательский институт сельского хозяйства Крыма»

г. Cимферополь

 

НОВЫЙ ПЕРСПЕКТИВНЫЙ ШТАММ BACILLUS AMYLOLIQUEFACIENS

 

Биологический контроль численности фитопатогенных микроорганизмов, в том числе с помощью препаратов на основе микроорганизмов с антагонистическими свойствами, как прием биологического земледелия, может обеспечить контроль развития болезней в течение всего периода вегетации растений и в период хранения продукции и семян [1]. Успешное применение микроорганизмов с высокой анта­го­нистической активностью зависит от влияния на растение продуцируемых ими веществ.

Постоянный скрининг активных природных штаммов микроорганизмов – продуцентов биологически активных соединений, обеспечивающих защиту растений от возбудителей заболеваний, является актуальным.

Объектом исследований стал новый штамм Bacillus sp. 36, выделенный из чернозема обыкновенного опытного поля Кировоградского института АПП, как бактерия, обладающая антагонистическими свойствами к фитопатогенам.

На основании микроскопирования микроорганизм был отнесен к роду Bacillus. Клетки штамма в односуточной культуре на твердой агаровой среде – малоподвижные короткие палочки, движение вокруг центральной оси, редко спаренные. На вторые сутки наблюдается спорообразование, спора образуется ближе к одному из полюсов клетки, присутствуют сводные споры в небольшом количестве.

Микроорганизм усваивает сахарозу, манит, раффинозу, крахмал, этанол, глюкозу, лактозу, мелибиозу, рибозу. Не усваивает D-ксилозу, гликоген. Может разлагать полиоксиэтилены Tween 20 и Tween 80. Отмечен рост при рН 5.7 и при 7 % NaCl. Максимальная температура роста составляет 50º С. Не отмечено роста в анаэробных условиях. При росте на МПБ образует пленку. Образует аммиак, не образует индол. Разлагает казеин, пептонизирует, а затем полностью разлагает осадок на лакмусовом молоке, гидролизует крахмал. Ферментирует эскулин. На среде с мочевиной не проявляет уреазной активности, обладает каталазной активностью. На среде Кинга не образует пигментов. Разжижает желатину. Рост на гороховом агаре обильный. Колонии на МПА кремово-белые.

Проведенный генетический анализ с использованием анализа нуклеотидной последовательности гена 16S рРНК и методов AFLP-ПЦР: Rep-ПЦР: ERIC-ПЦР [2, 3], показал, что исследуемый штамм по анализу 16S рРНК совпадает с типовыми штаммами рода Bacillus. Видовая идентификация, проведенная на основе анализа участка субъединицы Б гиразы (gyrB), показала сходство исследуемого штамма с типовым штаммом B. amyloliquefaciens ATCC 23842T. Согласно методу saAFLP, позволяющему отобразить не только видовое, но и штаммовое разнообразие, штамм Bacillus sp.36 также попал в одну группу со штаммом B. amyloliquefaciens ATCC 23842T.

Показано, что в надосадочной жидкости культуры штамма, полученной на жидкой синтетической среде Козера, содержится 16 органических кислот. Наибольшее количество – 14728, 67 мг/кг – пальмитиновой кислоты и 8278,26 мг/кг стеариновой кислоты. Обнаружены также кислоты: 3(3,5–ди–трет–бутил–4–оксифенил)пропановая, олеиновая, миристиновая, пальмитолеиновая, пентадекановая, 12-метилтетрадекановая, линолевая, линоленолевая, лауриновая, бегеновая, арахиновая, 2-этилгексановая и капроновая.

Резистентность штамма к антибиотикам является важным показателем. Так, штамм B. amyloliquefaciens 36 не обладал резистентностью к цефалоспориновым антибиотикам, которые разрушают клеточную стенку микроорганизмов (цефазолин, цефтриаксон, цефатоксим), – наблюдалось полное отсутствие роста культуры или его ингибирование до 20 мм. Антибиотиками аминогликозидной группы (стрептомицин, канамицин, амикацина сульфат), нарушаюшими синтез белков рибосомами, рост культуры подавляется на 10-11мм. Также не наблюдалось устойчивости штамма и к антибиотикам класса пенициллинов, действующих на поздних этапах синтеза клеточной стенки. Зона подавления роста штамма пенициллином, ампициллином, бициллином-3, бициллином-5 составляла 12-20 мм.  

По антагонистическим свойствам штамм не уступает референтному штамму B. subtilis D-26 и имеет широкий спектр антагонистической активности к микромицетам – возбудителям болезней сельскохозяйственных растений. Штамм может быть рекомендован для использования в качестве биоагента микробного препарата.

Исследования проведены при поддержке РФФИ проект № 14-44-01652 р_юг_а.

 

Литература

1. Лапа С.В., Рева О.М. Деякі властивості штамів Bacillus subtilis, активних щодо збудників плодів та ягід // Мікробіол. журн., 2005.- 67,№ 1. – С.22-31.

2. Epplen J.T. Oligonucleotide fingerprinting using simple repeat motifs: a convenient, ubiquitously applicable method to detect hypervariability for multiple purposes // Epplen JTAmmer HEpplen CKammerbauer CMitreiter RRoewer LSchwaiger WSteimle VZischler HAlbert E, et al. EXS. 1991; p.58:50-69. Review.

3. Zotov V.S., Punina N.V., Khapchaeva S.A., Didovich S.V., Melnichuk T.N., Topunov A.F. New taxonomic marker – hin-region // Ekologicheskaya genetika. 2012. Т. 2. с. 49–62.

Категорія: Секція_2_Технології_і_природа | Додав: Admin (18.03.2015)
Переглядів: 700
Всього коментарів: 0